DNase I溶液（蛋白提取用）

DNase I Solution（for protein isolation）

●     產(chǎn)品組成：

● 保存：-20℃粉末未配制有效期3年；DNaseI配制成溶液后-20℃有效期一年。

● 產(chǎn)品簡介：

脫氧核糖核酸酶Ⅰ(DNaseⅠ)是一種非特異性核酸酶切酶，可用于降解單鏈或雙鏈DNA，其原理為DNaseⅠ水解磷酸二酯鍵產(chǎn)生帶有5'-磷酸基團(tuán)和3'-OH的單核苷酸或寡核苷酸。   本產(chǎn)品能迅速水解核酸，降低粘度以減少處理時(shí)間和增加蛋白產(chǎn)量。該酶可以與細(xì)菌蛋白提取液和RIPA 裂解液等蛋白抽提試劑配合使用。

本產(chǎn)品RNase活性未檢測，不能用于反轉(zhuǎn)錄反應(yīng)（RT-PCR）中DNA的去除使用。RT-PCR中DNA污染的去除請選擇RNase-free DNase I（貨號：RTT2014）。

● 活性定義：

One unit of the enzyme completely degrades 1 μg of DNA in 10 min at37°C. 

● DNaseI溶解液組份：

20 mMsodium acetate pH 6.5, containing5 mMCaCl₂ and 0.1 PMSF, 50% (v/v) glycerol

● DNaseI失活或抑制：

加入EDTA至終濃度為2.5mM后，65℃加熱10分鐘可使DNase I失活。酚氯仿抽提也可以使DNase I失活。金屬離子螯合劑，達(dá)到毫摩爾/升濃度的鋅離子，0.1%的SDS，DTT、巰基乙醇等還原劑，50-100mM以上鹽濃度均對DNase I有顯著抑制作用。

● 使用方法：

 1、DNase I溶液的配制：取5ml DNase I溶解液全部加到DNase I粉末中，充分混勻，配成濃度為2000U/ml DNase I溶液。-20℃貯存。

2、蛋白提取液中按照1/100 體積加入DNase I溶液（使其終濃度為20U/ml），1/100體積加入1MMgCl₂，37℃處理30-60分鐘。

   注：由于EDTA能螯合酶活性需要的Ca²⁺和Mg²⁺，蛋白初始裂解液中要去除EDTA，否則會(huì)降低DNase的消化能力。

3、繼續(xù)后續(xù)蛋白提取實(shí)驗(yàn)。