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2×Taq plus PCR MasterMix
● 產(chǎn)品包裝:
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目錄號 |
包裝 |
2×Taq plus MasterMix(不含染料) |
RTS3103-02 |
500μl |
RTS3103-03 |
5×500μl |
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2×Taq plus MasterMix(含染料) |
RTS3104-02 |
500μl |
RTS3104-03 |
5×500μl |
注:以50μl PCR反應(yīng)體系為例,每次使用25μl 2×MasterMix,500μl可做20次 50μl PCR反應(yīng)。
● 儲存條件: -20℃可長期保存;4℃穩(wěn)定貯存3個月。經(jīng)常使用時,一旦融化后請4℃貯存,盡量避免反復(fù)凍融。
● 產(chǎn)品簡介:
本產(chǎn)品包含Taq plus DNA聚合酶、dNTPs、MgCl2、反應(yīng)緩沖液、PCR反應(yīng)的增強(qiáng)劑和優(yōu)化劑以及穩(wěn)定劑,濃度為2×。使用時,只需補(bǔ)加實(shí)驗所需的引物和模板后即可進(jìn)行PCR反應(yīng),可最大限度的減少人為誤差,具有快速簡便、穩(wěn)定性好等優(yōu)點(diǎn)。適用于常規(guī)PCR反應(yīng)、復(fù)雜模板(如GC含量高,有二級結(jié)構(gòu))的擴(kuò)增以及大規(guī)?;驒z測。使用該產(chǎn)品得到的PCR擴(kuò)增產(chǎn)物末端含有一個A堿基,可以直接用于TA克隆。
● 質(zhì)量控制:
經(jīng)檢測無外源核酸酶活性;PCR方法檢測無宿主殘余基因組DNA;能有效地擴(kuò)增人基因組中的單拷貝基因。
● 使用說明:
1. 冰浴中徹底融化2×MasterMix,混勻后Minispin將溶液收集到管底。
2. 按照下表在0.2ml PCR管中制備反應(yīng)體系:
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50μl反應(yīng)體系 |
終濃度 |
2×MasterMix |
25μl |
1× |
上游引物 10μM |
1-5μl |
0.2-0.8 μM |
下游引物 10μM |
1-5μl |
0.2-0.8 μM |
模板 |
× μl |
10pg-1μg |
水 |
補(bǔ)至50μl |
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3. 快甩離心將反應(yīng)液收集到管底。
4. PCR儀如果沒有熱蓋加熱的話,補(bǔ)加25μl礦物油。
5. PCR儀上執(zhí)行以下程序:
步驟 |
溫度 |
時間 |
循環(huán)數(shù) |
初始變性 |
94℃ |
5 min |
1 |
變性 |
94℃ |
30 sec |
25-40* |
退火 |
Tm-5℃* |
30 sec |
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延伸 |
72℃ |
1 min/kb |
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最后延伸 |
72℃ |
5 min |
1 |
*注: PCR 反應(yīng)條件視模板、引物等的結(jié)構(gòu)條件不同而各異。在實(shí)際操作中需根據(jù)模板、目的片段的大小、堿基序列和引物的長短等具體情況,設(shè)定最佳的反應(yīng)條件(溫度、時間等)。
6. 電泳檢測。
注:使用含染料的2×MasterMix可以直接上樣;不含染料的2×MasterMix要與6×loading buffer混合后上樣。
實(shí)驗示例:
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