RTScript All-in-One 1st-Strand cDNA Synthesis Kit

●  產(chǎn)品貨號(hào)及規(guī)格：

●  產(chǎn)品組成：

●  產(chǎn)品簡介：

本試劑盒含有反轉(zhuǎn)錄需要的全部試劑（RTScript MMLv Reverse Transcriptase，RNase Inhibitor，dNTP、反應(yīng) Buffer，Oligo (dT)₁₈，Random primer）,濃度為5×。進(jìn)行RNA反轉(zhuǎn)錄反應(yīng)時(shí)，只需加入模板和RNase Free H₂O 即可高效合成第一鏈cDNA，大大簡化了操作過程、提高了效率、減少了操作過程中的人為誤差。本制品含有去基因組成分gDNA Remover，以RNA為模板進(jìn)行cDNA第一鏈合成時(shí)，可以同步去除基因組DNA污染，與傳統(tǒng)DNaseI消化對(duì)比，gDNA Remover消化后無需加入EDTA進(jìn)行失活；反應(yīng)結(jié)束后，65℃加熱2分鐘，就可以不可逆失活。具有快速簡便、重復(fù)性高、特異性好、靈敏度高和穩(wěn)定性好的特點(diǎn)。該試劑盒采用的反轉(zhuǎn)錄酶去除了 RNase H活性，從而避免反轉(zhuǎn)錄過程中降解RNA。 同時(shí)經(jīng)過突變文庫篩選，使得其熱穩(wěn)定性更強(qiáng)，可耐受50℃高溫反應(yīng)。相比于低溫條件下反轉(zhuǎn)錄反應(yīng)，采用高溫反轉(zhuǎn)錄可顯著打開 RNA二級(jí)結(jié)構(gòu)，從而提高復(fù)雜 RNA 模板的擴(kuò)增性能、提高反轉(zhuǎn)錄 cDNA的長度（可以獲得12 kb cDNA）和產(chǎn)量，從而提高后續(xù)檢測(cè)的靈敏度。合成的第一鏈 cDNA可廣泛用于 2nd Strand 的合成、 雜交、 PCR擴(kuò)增、Real-Time PCR 反應(yīng)等。

●  貯存和運(yùn)輸：

開封后-20℃貯存兩年；濕冰運(yùn)輸。

●  使用方法：

一. 去除基因組DNA污染：

1.1冰上配制如下體系：

1.2輕柔混勻，快甩離心，37℃處理 2 min，去除基因組污染，冰上放置。

注：若RNA中基因組DNA污染嚴(yán)重，可以延長37℃處理5 min。

1.3 65℃處理2 min，失活gDNA Remover，冰上放置。

二. 第一鏈cDNA合成（反轉(zhuǎn)錄反應(yīng)）：

2.1冰上配制如下體系：

2.2 反轉(zhuǎn)錄：輕柔混勻，快甩離心； 50℃孵育15 min，

2.3 終止反應(yīng)：85℃孵育 5 min，終止反應(yīng)。

反應(yīng)產(chǎn)物可直接用于 PCR，如果不立即使用，-20℃ 保存，長時(shí)間保存建議-80℃ 放置。

●  注意事項(xiàng)：

    5×RTScript 1st Strand cDNA Synthesis MasterMix中已經(jīng)包含Oligo (dT)₁₈和Random primer，不僅適用于包含poly(A)結(jié)構(gòu)的真核生物mRNA，也適用于不含poly(A)結(jié)構(gòu)的原核生物RNA，真核生物rRNA和tRNA等模板，但不適用于miRNA等小RNA模板。