PAGE凝膠DNA回收試劑盒（吸附柱法）（目錄號(hào)：RTP3104）

● 試劑盒內(nèi)容及保存：

● 運(yùn)輸、儲(chǔ)存條件和效期：

常溫運(yùn)輸，常溫保存，有效期為一年。

● 產(chǎn)品簡(jiǎn)介及使用說(shuō)明：

本試劑盒適用于從PAGE 膠中回收50-500 bp 的雙鏈DNA 片段，回收效率可達(dá)30-80%。該試劑盒采用特殊的吸附膜，能夠有選擇性地吸附核酸分子，去除其他雜質(zhì)，得到高質(zhì)量的DNA回收產(chǎn)物。所得到的DNA可直接用于酶切、連接、測(cè)序等后續(xù)的分子生物學(xué)試驗(yàn)。

注：該試劑盒也能回收單鏈DNA片段，但回收效率偏低。

本試劑盒具有以下特點(diǎn)：

1. 適用范圍廣，回收效率高，對(duì)于50-500 bp之間的DNA片段，回收效率在30-80%。

2. 操作簡(jiǎn)單快速

3. 無(wú)需酚氯仿抽提，無(wú)需乙醇沉淀。

按照每次使用200 μl提取液A計(jì)算，試劑盒可以使用50次。

● 使用方法：

1.電泳：

PAGE電泳后染色觀察DNA 并確定需要回收的DNA 條帶的位置，確保目的DNA片段與其他片段分開(kāi)。

2.切膠：

用干凈的刀片小心切取含DNA片段的PAGE凝膠到一個(gè)干凈的1.5 ml離心管中。

注：盡可能多地把多余的膠切除，否則多余的凝膠會(huì)降低DNA的回收效率。

3.DNA提?。?

3.1 根據(jù)膠塊重量，每100 mg膠塊加200 μl比例加入提取液A（如膠塊不足100 mg，用滅菌水補(bǔ)足100 mg），用塑料研磨杵充分將凝膠塊搗碎。

注：膠的重量控制在0.3克以下為宜，否則會(huì)導(dǎo)致DNA片段擴(kuò)散提取不完全。

3.2  55℃水浴30分鐘，間隙混勻，促進(jìn)凝膠中的DNA擴(kuò)散到溶液中。

3.3  13000 rpm離心5分鐘，小心將上清液(含DNA片段)轉(zhuǎn)移到一個(gè)新的1.5 ml離心管中。

4. 上清液中依次加入3倍上清體積結(jié)合液B和1倍上清體積的助沉劑C，混勻。

注：如果此時(shí)溶液變?yōu)榉奂t色，請(qǐng)加入少量3MNaAc pH5.2（一般說(shuō)來(lái)，10 μl足矣），使溶膠液變?yōu)辄S色再上柱離心。

5. 將上一步所得溶液加入到吸附柱CA1中（吸附柱放入收集管中），常溫放置2分鐘，13,000 rpm離心60秒，倒掉收集管中的廢液，將吸附柱重新放入收集管中。

注：吸附柱CA1的有效容積為750 μl，如溶液體積大于750 μl，分次上柱，保證全部溶液都加到吸附柱中。

6. 向吸附柱CA1中加入700 μl漂洗液PW（使用前請(qǐng)先檢查是否已加入無(wú)水乙醇），13,000 rpm離心60秒，倒掉廢液，將吸附柱重新放入收集管中。

7. 向吸附柱CA1中加入500 μl漂洗液PW，13,000 rpm離心30-60秒，倒掉廢液。

8. 將離心吸附柱CA1放回收集管中，13,000 rpm離心2分鐘，盡量除去漂洗液。

注：此步必不可少！如果漂洗液有殘留會(huì)影響回收效率和DNA質(zhì)量，進(jìn)而影響下游實(shí)驗(yàn)；離心后將吸附柱蓋子打開(kāi)，常溫放置2分鐘，這樣將有助于徹底揮發(fā)殘余乙醇。

9. 將吸附柱放到一個(gè)干凈1.5 ml離心管中，向吸附膜中間位置懸空滴加適量65℃預(yù)熱的洗脫緩沖液EB（一般不要少于30 μl），常溫放置2分鐘。13,000 rpm離心1分鐘收集DNA溶液。

注：CA1柱的洗脫體積不應(yīng)少于30 μl，體積過(guò)小將會(huì)降低回收效率；洗脫液的pH值對(duì)于洗脫效率有很大影響。由于PAGE膠中片段較小，不建議用水進(jìn)行洗脫。

10. DNA產(chǎn)物-20℃保存。

● 實(shí)驗(yàn)示例：