單鏈DNA Marker（20-75 nt）                      

● 產(chǎn)品編號(hào)及規(guī)格：

● 產(chǎn)品簡(jiǎn)介：

單鏈DNA Marker由不同長(zhǎng)度的單鏈DNA分子混合而成，7條帶的大小為20，25，30，35，40， 50，75 nt。該產(chǎn)品不含有上樣緩沖液，可以根據(jù)實(shí)驗(yàn)需求使用不同的上樣緩沖液，用于尿素變性電泳或非變性電泳。電泳后的PAGE膠可以使用單鏈DNA PAGE電泳染色試劑盒（Cat：RTS5103），核酸PAGE電泳染色試劑盒（Cat：RTS5102），核酸快速高靈敏度染色試劑盒（Cat：RTS5101）或核酸染料如RealSafe Red（貨號(hào)：GR002）或RealSafe All（貨號(hào)：GR004）進(jìn)行染色，均可以得到清晰的條帶分離效果。

產(chǎn)品附帶2×TBE尿素上樣緩沖液和2×非變性PAGE DNA上樣緩沖液，方便待檢樣品的上樣。

配制好的即用型單鏈DNA Marker以每次上樣5 μl計(jì)算，該產(chǎn)品可以使用大約25次。

●  保存條件和運(yùn)輸：

按照標(biāo)簽溫度貯存；有效期2年；濕冰運(yùn)輸。

● 使用方法：

一. 即用型單鏈DNA Marker（20-75 nt）配制方法：

1.1 進(jìn)行尿素變性電泳：

1.2 進(jìn)行非變性電泳：

二. 凝膠制備：

注：以下使用方法均以8×10cm凝膠 厚1.0mm示例，其他規(guī)格凝膠請(qǐng)適當(dāng)調(diào)整。

2.1 TBE-尿素凝膠制備：

2.1.1 可以選擇DNA尿素PAGE電泳試劑盒（Cat：RTE4102））或按照以下程序制膠：

表一 TBE-尿素PAGE分離膠配方表 (總體積5 ml，適用于厚度1.0 mm小板膠)

2.1.2在凝膠模具中灌入適量分離膠溶液（對(duì)于mini-gel，凝膠液加至約距前玻璃板頂端1.5 cm或距梳齒約0.5 cm即可），然后在分離膠溶液上輕輕覆蓋一層1-5 cm的水層，使凝膠表面保持平整。

2.1.3靜置10-20分鐘，待分離膠和水層之間出現(xiàn)一個(gè)清晰的界面后，說(shuō)明凝膠已聚合。

注：凝膠的聚合時(shí)間與環(huán)境溫度有關(guān)。夏天溫度較高時(shí)，聚合較快；冬天氣溫低時(shí)，聚合時(shí)間會(huì)延長(zhǎng)?？梢愿鶕?jù)環(huán)境溫度的不同調(diào)節(jié)APS的加入量。

2.1.4去除覆蓋在分離膠上的水層；按照表二將不同體積成分在一個(gè)小燒杯中混合；最后加入10%過(guò)硫酸銨和TEMED，輕輕攪拌使其混勻，避免產(chǎn)生氣泡。

表二 TBE-尿素PAGE 4%濃縮配方表 (總體積2 ml，適用于1.0mm厚度膠)

2.1.5將濃縮膠溶液加至分離膠的上面，直至凝膠溶液到達(dá)前玻璃板的頂端；將梳子插入凝膠內(nèi)，避免產(chǎn)生氣泡。

2.1.6靜置30-60分鐘，等待濃縮膠聚合。

注：凝膠的聚合時(shí)間與環(huán)境溫度有關(guān)。夏天溫度較高時(shí)，聚合較快；冬天氣溫低時(shí)，聚合時(shí)間會(huì)延長(zhǎng)。可以根據(jù)環(huán)境溫度的不同調(diào)節(jié)APS的加入量。

2.2非變性凝膠制備：

2.2.1可以選擇DNA非變性PAGE電泳試劑盒（貨號(hào)：RTE4101）或按照以下程序制膠。

2.2.2按照表三將不同體積的成分在小燒杯或試管中混合；最后加入10%APS和TEMED，輕輕攪拌使其混勻，避免產(chǎn)生氣泡。

2.2.3在凝膠模具中灌入適量分離膠溶液（對(duì)于mini-gel，凝膠液加至約距前玻璃板頂端1.5 cm或距梳齒約0.5 cm即可），然后在分離膠溶液上輕輕覆蓋一層1-5 cm的水層，使凝膠表面保持平整。

2.2.4靜置10-20分鐘，待分離膠和水層之間出現(xiàn)一個(gè)清晰的界面后，說(shuō)明凝膠已聚合

表三 TBE-非變性PAGE分離膠配方表 (總體積5 ml，適用于厚度1.0 mm小板膠)

注：凝膠的聚合時(shí)間與環(huán)境溫度有關(guān)。夏天溫度較高時(shí)，聚合較快；冬天氣溫低時(shí)，聚合時(shí)間會(huì)延長(zhǎng)?？梢愿鶕?jù)環(huán)境溫度的不同調(diào)節(jié)APS的加入量。

2.2.5去除覆蓋在分離膠上的水層；按照表四將不同體積成分在一個(gè)小燒杯或試管中混合；最后加入10%過(guò)硫酸銨和TEMED，輕輕攪拌使其混勻，避免產(chǎn)生氣泡。

表四 TBE-非變性PAGE 4%濃縮配方表 (總體積1.5 ml，適用于1.0mm厚度膠)

2.2.6將濃縮膠溶液加至分離膠的上面，直至凝膠溶液到達(dá)前玻璃板的頂端；將梳子插入凝膠內(nèi)，避免產(chǎn)生氣泡。

2.2.7靜置30-60分鐘，等待濃縮膠聚合。

注：凝膠的聚合時(shí)間與環(huán)境溫度有關(guān)。夏天溫度較高時(shí)，聚合較快；冬天氣溫低時(shí)，聚合時(shí)間會(huì)延長(zhǎng)?？梢愿鶕?jù)環(huán)境溫度的不同調(diào)節(jié)APS的加入量。

三. 樣品制備：

3.1 根據(jù)實(shí)驗(yàn)?zāi)康?，配制即用型單鏈DNA Marker樣品（步驟一）。單鏈DNA樣品使用尿素變性電泳，雙鏈DNA樣品使用非變性電泳，單鏈/雙鏈混合樣品使用非變性電泳。

四. 電泳：

4.1. 預(yù)電泳（可選）：電泳槽內(nèi)外加入適量1×TBE緩沖液穩(wěn)壓200V預(yù)電泳30分鐘。電泳結(jié)束后，用1×TBE緩沖液徹底沖洗加樣孔2-3次。

4.2.上樣：根據(jù)梳齒確定Marker上樣量， 一般是10齒1mm厚梳子上樣5 μl，15齒1mm厚梳子上樣3 μl。

4.3. 連接電源線(xiàn)，打開(kāi)電源開(kāi)關(guān)，按照以下條件電泳。

4.4. 等待上樣緩沖液的溴酚藍(lán)指示前沿到凝膠底部時(shí)終止電泳，取出凝膠進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)。

五．染色：