蛋白濃縮試劑盒（目錄號：RTD9101）

● 試劑盒內(nèi)容及保存：

● 儲存條件和效期：

試劑盒常溫運輸；收到后，按照標簽溫度貯存；本試劑盒有效期1年。

● 產(chǎn)品簡介：

試劑盒原理：在酸性條件下蛋白質(zhì)形成不溶性鹽，使蛋白質(zhì)變性導致構象發(fā)生改變，蛋白暴露出較多的疏水性基團，蛋白發(fā)生聚集而沉淀。為了避免酸對后續(xù)電泳的影響，沉淀的蛋白要使用丙酮等洗滌液徹底清洗去除酸。濃縮后的蛋白可以用于SDS-PAGE和Western blot 前的蛋白樣品處理。

以每次濃縮800 μl蛋白樣品計算，本試劑盒可以使用40-45次。

● 操作方法：

1.  準備1.5 ml干凈的離心管，加入800 μl蛋白樣品溶液。

可選：如果樣品溶液中離子強度低于10 mM，補加8 μl的1M NaCl溶液。低于800 μl的樣品，加入8 μl 1 M NaCl，用水補齊體積至800 μl，使NaCl終濃度為10 mM。

2. 加入蛋白溶液1/10體積的試劑C-助沉劑-80 μl，混勻，常溫靜置15分鐘。

注：加入試劑C后溶液變渾濁。

3.  加入步驟2溶液1/4體積的試劑A -220 μl，渦旋震蕩10-30秒，使之充分混勻。

4.  冰浴放置15分鐘。

5. 4℃，12000 rpm（13000 g）離心10 分鐘。 注：離心后白色蛋白沉淀彌散性可見于離心管管壁上。

6.  小心去掉上清液，保留沉淀。

注：請小心操作，可以用移液器輔助徹底吸棄上清。

7.  沉淀中加入600 μl預冷的丙酮（自備，試劑盒不提供），渦旋震蕩10-30秒，徹底混勻。

   注：丙酮有刺激性氣味，請在通風櫥內(nèi)操作。

8.  冰浴15分鐘。

9. 4℃，12000 rpm（13000 g) 離心10分鐘；在通風櫥中，倒掉上清。殘留上清用10 μl吸頭徹底吸棄，沉淀物通風晾干30-60秒。注：沉淀不能過分干燥，否則將導致蛋白不好溶解。

10. 蛋白溶解：

根據(jù)下表選擇溶解緩沖液：

●實驗示例：