非變性PAGE凝膠制備及電泳試劑盒（貨號(hào):RTD6130）
Native PAGE Gel
Preparation and Electrophoresis Kit
● 產(chǎn)品組成：
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貨號(hào)
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名稱
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規(guī)格
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保存條件
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AC2913-01
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30%PAA(29:1)
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100 ml
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4℃
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RTD6130-02
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4×分離膠緩沖液 pH8.8
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100 ml
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4℃
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RTD6130-03
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4×濃縮膠緩沖液 pH6.8
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50 ml
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4℃
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AP020P
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APS（干粉）
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0.5 g
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RT
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TA0761-01
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TEMED
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0.5 ml
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4℃，避光
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PL111
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5×非變性非還原蛋白上樣緩沖液
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1 ml
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-20℃
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TG130P
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5×Tris-甘氨酸電泳緩沖液（干粉）
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1L
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RT
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● 產(chǎn)品簡介：
本公司提供的非變性PAGE凝膠制備及電泳試劑盒包含凝膠制備及電泳所需的全部試劑，用戶只需自備制膠器具和蒸餾水。本試劑盒可用于配制非變性(native)PAGE凝膠。本試劑盒可配制30-50塊常規(guī)大小的非變性PAGE膠。
特別說明：由于本系統(tǒng)采用非連續(xù)Laemmli凝膠系統(tǒng)，分離膠pH為8.8，因此要求待分離的蛋白等電點(diǎn)pI≤7.0，這樣蛋白在凝膠系統(tǒng)內(nèi)帶負(fù)電荷，在凝膠電泳中才能正常向正極泳動(dòng)。如果待分離的蛋白等電點(diǎn)pI＞7.0，請(qǐng)選擇堿性電泳凝膠系統(tǒng)分離（貨號(hào)RTD6131）。
● 使用說明：
一 配制分離膠（各試劑使用量請(qǐng)參考表二）
根據(jù)目的蛋白的分子量大小選擇合適的凝膠濃度（表一），再按照下面的分離膠配方表（表二）配制非變性PAGE的分離膠(即下層膠)。
表一 不同濃度的PAGE分離膠的最佳分離范圍：
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SDS-PAGE分離膠濃度
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最佳分離范圍
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6%
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50-150kD
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8%
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30-90kD
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10%
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20-80kD
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12%
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12-60kD
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15%
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10-40kD
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10% APS配制-5 ml：
將0.5 gAPS干粉溶于5 ml滅菌水中，徹底溶解后分裝，1 ml/支，-20℃?zhèn)浯?，每次取一管使用?0% APS應(yīng)盡量減少室溫存放時(shí)間，以防失效。10%APS在4℃有效期為一周，-20℃有效期6個(gè)月。若發(fā)現(xiàn)凝膠聚合時(shí)間延長，應(yīng)考慮更換使用-20度保存的10% APS。
制備分離膠步驟：
1．根據(jù)下表，將不同體積的成分在小燒杯或試管中混合；先后加入TEMED和10%APS，輕輕攪拌使其混勻，避免產(chǎn)生氣泡
2．在凝膠模具中灌入適量分離膠溶液（對(duì)于mini-gel，凝膠液加至約距前玻璃板頂端1.5 cm或距梳齒約0.5 cm即可），然后在分離膠溶液上輕輕覆蓋一層1-5 cm的水層，使凝膠表面保持平整。
3．靜置15-20分鐘，待分離膠和水層之間出現(xiàn)一個(gè)清晰的界面后，說明凝膠已聚合。
注：凝膠的聚合時(shí)間與環(huán)境溫度有關(guān)。夏天溫度較高時(shí)，聚合較快；冬天氣溫低時(shí)，聚合時(shí)間會(huì)延長?？梢愿鶕?jù)環(huán)境溫度的不同調(diào)節(jié)APS的加入量。
二 濃縮膠制備：
1．去除覆蓋在分離膠上的水層。
2．按照表一將不同成分在一個(gè)小燒杯或試管中混合；先后加入TEMED和10%過硫酸銨，輕輕攪拌使其混勻，避免產(chǎn)生氣泡。
3．將濃縮膠溶液加至分離膠的上面，直至凝膠溶液到達(dá)前玻璃板的頂端。
4．將梳子插入凝膠內(nèi)，避免產(chǎn)生氣泡。
5．靜置30-60分鐘，等待濃縮膠聚合。
注：凝膠的聚合時(shí)間與環(huán)境溫度有關(guān)。夏天溫度較高時(shí)，聚合較快；冬天氣溫低時(shí)，聚合時(shí)間會(huì)延長?？梢愿鶕?jù)環(huán)境溫度的不同調(diào)節(jié)APS的加入量。
三 電泳：
凝膠凝固好后，根據(jù)以下配方準(zhǔn)備電泳緩沖液。
5×Tris-甘氨酸電泳緩沖液（不含SDS）的配制-1 L：將一包5×Tris-甘氨酸電泳緩沖液干粉全部倒入1L燒杯中，加入約900 ml水徹底溶解，用水定容至1 L，即配成5×Tris-甘氨酸電泳緩沖液（此溶液不用調(diào)節(jié)pH值）。用前再稀釋5倍即配成1×Tris-甘氨酸電泳緩沖液。
在電泳槽的內(nèi)槽內(nèi)加入1×Tris-甘氨酸電泳緩沖液(讓電泳緩沖液漫過加樣孔)，輕輕的撥出梳子，隨后在電泳槽外槽加入適量的1×Tris-甘氨酸電泳緩沖液。上樣，電泳，一般是濃縮膠80V，分離膠120V恒壓，等指示前沿溴酚蘭電泳到分離膠下緣后，結(jié)束電泳，染色或者進(jìn)行下一步實(shí)驗(yàn)。
實(shí)驗(yàn)示例
RTD6130 非變性PAGE凝膠制備及電泳試劑盒發(fā)表文章
1. [2021 IF=6.95] A
teleost interleukin-16 is implicated in peripheral blood leukocytes recruitment
and anti-bacterial immunity.
Product: RTD6130 非變性PAGE凝膠制備及電泳試劑盒
Author:Xue-peng Li, Guan-yu Chen, Jian Zhang, Deng-lai Li, Ji-xing Feng.
Journal: International Journal of Biological
Macromolecules. 2021,Vol.187, 821-829.
Institution： School of Ocean, Yantai University, Yantai, China
Paper link：https://doi.org/10.1016/j.ijbiomac.2021.07.151
2. [IF=17.69
2021] Turn air-captured CO2 with methanol into amino acid and pyruvate
in an ATP/NAD(P)H- free chemoenzymatic system.
Product: RTD6130 非變性PAGE凝膠制備及電泳試劑盒; PL111 5×非變性非還原蛋白上樣緩沖液; RTD6142 高分子量非變性電泳蛋白質(zhì)Marker II（45-669 kD）
Author: Jianming Liu, Han Zhang, Yingying Xu, HaoMeng, An-Ping Zeng.
Journal: Nature
Communications. 2023，14:2772.
Institution： Westlake University
Paper link： http://www.nature.com/articles/s41467-023-38490-w
